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Examinando por Autor "Lario, Luciana Daniela"

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    Efecto del daño al ADN por UV-B en plantas: estudio de la interacción de proteínas remodeladoras de la cromatina y el sistema de reparación de bases incorrectamente apareadas
    (2013) Lario, Luciana Daniela; Casati, Paula; Spampinato, Claudia P.
    La luz es uno de los factores más importantes que regulan el crecimiento y el desarrollo de las plantas. Sin embargo, el aumento de la radiación UV-B, debido a la acción antropogénica, puede tener un impacto negativo en los cultivos, debido a una disminución de la producción de biomasa. A nivel molecular, esta radiación provoca lesiones en el ADN, las cuales, si no son reparadas, perturban el metabolismo celular al impedir que ocurran los procesos de transcripción y replicación del genoma. Por tal motivo, los organismos eucariotas han desarrollado eficientes mecanismos de reparación del ADN, y han coordinando estos procesos con el remodelado de la cromatina y con la regulación del progreso del ciclo celular. El este trabajo de Tesis, se procedió a analizar la respuesta de las plantas frente al daño producido en el ADN por la radiación UV-B. En primer lugar, se encontró que los genes codificantes del heterodímero MutSα (MSH2 y MSH6), y de las chaperonas de histona ASF1 (ASF1A y ASF1B), se inducen en presencia de UV-B, y estarían involucrados en la reparación de CPDs. Además, se observó que MSH2 participaría en la señalización del arresto del ciclo celular, en respuesta al daño producido en el ADN por esta radiación. Por otra parte, se corroboró que los genes ASF1 y MSH se encuentran regulados por el ciclo celular, presentando un máximo de expresión durante la fase S. Además, se determinó que MSH6, ASF1A y ASF1B son blancos de regulación de los factores de transcripción E2F, y que la expresión de algunos de dichos factores (E2Fa-E2Fd), a su vez, se modula por la radiación UV-B. Finalmente, mediante ensayos de coinmunoprecipitación, se encontró que las proteínas ASF1 interaccionan con las histonas H3 y H4 acetiladas en sus extremos N-terminales, y con las proteínas acetiltransferasas HAM1/HAM2, cuyo homólogo en humanos, denominado Tip60, se encuentra involucrado en la activación del arresto del ciclo celular y en la reparación del ADN en respuesta al estrés genotóxico. Estos resultados confirman la regulación coordinada de los genes involucrados en la reparación del ADN, el remodelado de la cromatina, y el arresto del ciclo celular, en respuesta al daño al ADN provocado por la radiación UV-B en plantas.
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    Optimization of protease production and sequence analysis of the purified enzyme from the cold adapted yeast Rhodotorula mucilaginosa CBMAI 1528
    (Elsevier, 2020-10-21) Lario, Luciana Daniela; Pillaca-Pullo, Omar Santiago; Sette, Lara Durães; Converti, Attilio; Casati, Paula; Spampinato, Claudia P.; Pessoa, Adalberto
    Enzymes from cold-adapted microorganisms are of high interest to industries due to their high activity at low and mild temperatures, which makes them suitable for their use in several processes that either require a supply of exogenous energy or involve the use of heat labile products. In this work, the protease production by the strain Rhodotorula mucilaginosa CBMAI 1528, previously isolated from the Antarctic continent, was optimized, and the purified enzyme analyzed. It was found that protease production was dependent on culture medium composition and growth temperature, being 20 C and a culture medium containing both glucose and casein peptone (20 and 10 g/L, respectively) the optimal growing conditions in batch as well as in bioreactor. Moreover, mass spectrometry analysis revealed that the enzyme under study has a 100 % sequence identity with the deduced amino acid sequence of a putative aspartic protease from Rhodotorula sp. JG-1b (protein ID: KWU42276.1). This result was confirmed by the decrease of 95 % proteolytic activity by pepstatin A, a specific inhibitor of aspartic proteases. We propose that the enzyme reported here could be Rodothorulapepsin, a protein characterized in 1972 that did not have an associated sequence to date and has been classified as an orphan enzyme.