FCM - Doctorado en Ciencia Biomédicas

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Efectos de la insulina y la glucosa sobre la homeostasis del fosfato en la diabetes experimental
(2003) Di Loreto, Verónica Elina; Locatto, Marta Elba
La diabetes está asociada a pérdidas urinarias de fosfato. Los objetivos generales de esta tesis fueron identificar los mecanismos afectados por la insulina y la glucosa en relación al manejo renal de fosfato en la diabetes experimental y estudiar la repercusión de las pérdidas urinarias en la homeostasis del fosfato. Como modelo se utilizó la diabetes inducida por aloxano en la rata. Se estudiaron: las variables hemodinámicas renales, función paratiroidea, efecto de la hiperglicemia y del déficit de insulina sobre el manejo renal de fosfato. Se analizó la repercusión de las pérdidas urinarias de fosfato en tejidos representativos. Nuestros hallazgos indican que en las ratas diabéticas por aloxano: La gran cantidad de glucosa excretada en orina compite con el fosfato por los mecanismos reabsortivos. La hiperfosfaturia coexiste con niveles variables de insulina y es corregida disminuyendo la sobrecarga de glucosa al túbulo renal. La hiperfosfaturia no puede atribuirse a: . Alteraciones en la filtración glomerular. Esta disminuye en las ratas diabéticas. . Niveles elevados de la hormona paratiroidea. La extirpación de la glándula paratiroidea acentúa la hiperfosfaturia. . Los tejidos blandos y el hueso. ierden fosfato en relación a la severidad de la diabetes. Los niveles plasmáticos de fosfato se mantienen dentro del rango normal debido a la disminución en la reabsorción tubular causada por la gran oferta de glucosa.
Estudios del sistema nervioso autónomo, inmunológicos y hemorrheológicos en ratas experimentalmente infectadas con Trypanosoma cruzi, sus eventuales roles patogénicos en la miocardiopatía crónica
(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2004) Berra, Héctor H.; Revelli, Silvia S.
La Enfermedad de Chagas, producida por el parásito Trypanosoma cruzi, constituye un serio problema sanitario que abarca principalmente a toda América Latina. La infección en el ser humano ocurre en la mayoría de los casos, por penetración del parásito en el torrente sanguíneo, vehiculizado por las heces de un insecto vector triatomino. Luego de un período agudo, en el que pocos individuos presentan signos cardíacos o extracardíacos de la enfermedad, transcurren 10 a 20 años, correspondientes al llamado período indeterminado, hasta que se manifiesta algún indicio de enfermedad crónica evidente en un 25-30 por ciento de los infectados. Los principales sistemas afectados son, el nervioso, el digestivo y el cardiovascular. En éste último, la forma típica de afección es una miocarditis crónica, la más seria a su vez, por sus complicaciones frecuentemente graves y fatales. El uso de animales de laboratorio que reproduzcan el cuadro infeccioso y las complicaciones crónicas, ha permitido eludir la dificultad del estudio patogénico de esta enfermedad en seres humanos. En nuestro laboratorio, la infección de ratas de línea "l" reproduce el cuadro agudo con parasitemias evidentes, que decrecen luego de los 15 días post-infección, cuando los títulos de anticuerpos específicos comienzan a aumentar, para mantenerse elevados a lo largo del tiempo. En este modelo, los niveles de interleuquinas, óxido nítrico y factor de necrosis tumoral alfa, también se encontraron elevados en la etapa aguda. En el período crónico, el estudio histopatológico permitió detectar la presencia de miocarditis focal en el corazón y desorganización del plexo mientérico, sin cambios en la cuenta de neuronas en el intestino delgado y el colon. La reinfección no produjo un agravamiento de estas lesiones, como tampoco diferencias en el cuadro agudo y en la evolución de la enfermedad. La frecuencia cardíaca y la presión arterial se hallaron disminuidas en la etapa aguda, mientras que un aumento cronotrópico fue el hallazgo más consistente en el período crónico. Las respuestas cardiovasculares distintas pruebas fueron anormales, sugiriendo la posibilidad de disbalance en el control autónomo. En el aparato digestivo, no se hallaron anormalidades funcionales relevantes, a pesar de la desorganización evidente del plexo mientérico intestinal. Las propiedades reológicas de la sangre, también se encontraron modificadas desde el comienzo de la infección y se evidenciaron por el aumento de las viscosidades plasmática y sanguínea. El aumento de la producción de óxido nítrico parece involucrado, directa o indirectamente, en la evolución de la enfermedad y la patogenia de las lesiones orgánicas crónicas. En síntesis, los cambios inducidos por las respuestas inflamatoria e inmune, el consecuente aumento de la producción de óxido nítrico y las alteraciones microcirculatorias, podrían constituir importantes factores implicados en la producción de la miocardiopatía chagásica crónica. Los resultados presentados sugerirían, al mismo tiempo, que los cambios inducidos por la infección y las respuestas del huésped, para controlar a aquella, generarían las condiciones causales de las lesiones descriptas. Entre ellas, la hiperviscosidad sanguínea y el incremento en la producción de óxido nítrico en el modelo en ratas "l" parecen desempeñar un papel principal. El atractivo de tales hallazgos radica, en que el tratamiento orientado a reducir a ambas, debería repercutir en menor daño crónico en los órganos blanco.
Estudio de la dinámica ósea mandibular y de los procesos reabsortivos de la cresta alveolar en ratas diabéticas y controles
(2005) Garcia, María Florencia; Puche, Rodolfo CT
Estudio del hueso alveolar en ratas diabéticos
Regulación inmunoneuroendócrina de la respuesta inmune. estudios en pacientes tuberculosos con distinto grado de afectación pulmonar
(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2005) Mahuad, Carolina V.; Bottasso, Oscar A.
La Tuberculosis representa la principal causa de muerte producida por un agente infeccioso, transformándose en uno de los principales problemas en salud pública. Existe evidencia que demuestra que el tipo de RI que el huesped desarrolla, condicionar{ia el estadio clínico y curso de la TB. Asimismo, se conoce que productos del SI son capaces de desencadenar respuestas neuroendócrinas, las cuales podr¡an modular la RI en curso. Con el fin de explorar el rol de las interacciones entre ambos sistemas en el contexto de esta patología, en pacientes de diferente severidad se estudiaron: los efectos in vitro de cortisol y DHEA sobre la linfoproliferación y la producción de citoquinas; el perfil endócrino y de citoquinas plasmáticas y la capacidad de sobrenadantes de cultivos de células periféricas mononucleares basales y estimulados con Tso (sonicado de M.tuberculosis) para modificar la esteroidogénesis adrenal. In vitro se observó un efecto dosis dependiente supresor de cortisol tanto sobre la blastogénesis como sobre la producción de la mayoría de las citoquinas determinadas; particularmente cuanto mayor fue la capacidad de respuesta al antígeno Tso. La DHEA mostró efectos inmunoestimulantes en forma aislada o cuando se la combinó con GC, pero fue incapaz de revertir totalmente la inhibición mediada por cortisol. Existieron diferencias entre pacientes y controles. El perfil endócrino y de citoquinas arrojó diferencias significativas con los controles y así como entre subgrupos de severidad de la enfermedad. A medida que aumentaba la misma, el perfil hormonal tendió a favorecer respuestas humorales, ineficaces para enfrentar al MTB. Pudo demostrarse asimismo, que productos de la RI específica frente a MTB son capaces de afectar directamente la esteroidogénesis adrenal, generando una disminución en la producción de DHEA proporcional a la severidad de la TB. En base a lo observado puede concluirse que la interacción entre ambos sistemas influenciaría en buena medida el curso de la TB pulmonar en el huésped.
Formulación de un modelo matemático para la homeostasis de la alfa-2-macroglobulina
(2009) Aguirre, Cristina E; Rigalli, Alfredo
Desarrollo de un modelo matemático para estudio de la homeostasis de la proteína alfa-2-macroglobulina en al rata.
Investigación de la interacción calcio-fosfatasa alcalina intestinal de rata y su relación con la absorción intestinal de calcio
(2009) Brun, Lucas RM; Rigalli, Alfredo
El monofluorfosfato de sodio es utilizado con fines terapéuticos en pacientes con osteoporosis. Habitualmente dicha medicación es acompañada con la administración de sales de calcio (Ca2+). Luego de una dosis oral de monofluorfosfato de sodio una fracción es absorbida en el estómago mientras que en la luz intestinal el remanente es absorbido como fluoruro luego de la hidrólisis por la fosfatasa alcalina intestinal (FAi). Experimentos previos demostraron que el Ca2+ en concentración 50 mM inhibe no competitivamente la FAi de rata. La FAi tiene máxima expresión en duodeno y si bien no tiene aún un rol definido a nivel intestinal es llamativo que: 1) Su expresión es regulada por la calcitriol al igual que las proteínas que participan en la absorción de Ca2+. 2) La distribución del transportador TRPV6 tiene el mismo patrón que la FAi. 3) La FAi se expresa a nivel intestinal coincidiendo con el sitio de mayor absorción del catión. 4) La distribución de los dos mecanismos de transporte de Ca2+ (activo y pasivo) en intestino delgado sea similar a la distribución de las dos isoformas de FAi. El objetivo de este proyecto de tesis fue estudiar la interacción entre el Ca2+ y la FAi y el efecto de dicha interacción sobre el proceso de absorción del catión. Para cumplir con los objetivos se purificó FAi a partir del duodeno de ratas adultas y se produjo un anticuerpo por su inoculación a cobayos. Con la FAi purificada se hallaron los parámetros de fijación de Ca2+ a la FAi. Los resultados hallados indican que el Ca2+ se une a la FAi siguiendo un modelo de “n” sitios independendientes e igual afinidad. La constante de afinidad fue 19.1±8.4 mM-1 con 7.8±4.4 sitio de unión. El efecto del Ca2+ sobre la actividad de FAi se investigó espectrofotométricamente (1) y por electroforesis (2). En ambos casos la actividad de FAi mostró un efecto bifásico dependiendo de la concentración de Ca2+. A concentraciones de Ca2+ menores a 10 mM la actividad se incrementó linealmente, mientras que con concentraciones de Ca2+ mayores a 20 mM la relación fue inversa [ 1) r = 0.946; r = -0.703; (2) r = 0.721; r = -0.773] Se investigaron los cambios estructurales de la FAi purificada de rata producidos por incubación de la enzima con Ca2+ 50 mM por cromatografía de exclusión molecular y Western blot. Se detectaron dos fracciones de la enzima: 168±6 kDa (con actividad enzimática) y 425±45 kDa (sin actividad nzimática). El punto isoeléctrico de la enzima resultó más alto en la presencia de Ca2+ (0 mM = 4.35±0.02; 50 mM = 4.85±0.06) , pero fue el mismo para la enzima y la forma agregada. El tratamiento con EGTA después de la adición de Ca2+ no restauró la actividad enzimática, pero produjo desagregació de la enzima y aparición de sus monómeros, indicando que el Ca2+ podría ser requerido para la acción de la enzima o estar involucrado en la estabilidad de la estructura dimérica. Empleando el modelo de intestino aislado in situ y determinación histoquímica se determinó el efecto de las diferentes concentraciones de Ca2+ in vivo sobre la actividad de la FAi. No se observó el efecto bisfásico hallado in vitro, sino se observó un aumento significativo de la actividad de la enzima en la membrana a medida que se incrementó la concentración de Ca2+. Los resultados de expresión de FAi en la membrana no mostraron diferencias significativas entre los grupos afirmando que las diferencias de la actividad observadas por histoquímica no se deben a un cambio de expresión Estos datos sumados a que la FAi modifica su expresión de acuerdo a los niveles de calcitriol hacen sospechar que podría actuar en el mecanismo de absorción de Ca2+. La FAi hidroliza éster monofosfóricos generando fosfato y protones y existe evidencia de que la disminución del pH del lumen intestinal modificaría la actividad de los canales de Ca2+ TRPV6. Se realizaron experimentos de sacos duodenales evertidos a fin de determinar el pH y la absorción de Ca2+ en función de diferentes concentraciones de Ca2+ luminal (1, 10, 50 y 100 mM). Se observó un descenso significativo del pH en solución mucosa de los grupos con 10, 50 y 100 mM. La fracción de absorción disminuyó a medida que se incrementó la concentración de Ca2+, aralelamente al descenso de pH. Los experimentos indican que el fosfato generado por hidrólisis no sería el responsable de la disminución de la fracción de absorción. Finalmente cuando los experimentos de sacos evertidos duodenales fueron llevados a cabos en presencia de L-fenilalanina se observó un descenso de pH significativamente menor con un incremento en la fracción de absorción en todos los grupos experimentales. Estos resultados fortalecerían la hipótesis que el pH regularía la entrada de Ca2+ por vía transcelular y la FAi sería sensora de las concentraciones de Ca2+ luminal e impediría el ingreso de cantidades tóxicas del catión al enterocito.
Estudios moleculares y funcionales en células mononucleares de pacientes con Tuberculosis pulmonar, estimuladas in vitro con Mycobacterium tuberculosis y tratadas con Cortisol y/o Dehidroepiandrosterona
(2011) Bozza, Verónica Vanina; Bay, María Luisa
La tuberculosis (TB) constituye la enfermedad infectocontagiosa que mayor número de muertes causa en el mundo. Su curso no depende sólo de la activación del Sistema Inmune sino también de su interacción con otros Sistemas como el Neuroendócrino. En trabajos previos demostramos la inhibición provocada por el Cortisol (GC), tanto en la blastogénesis como en la producción de IFN-γ y TNF-α, y el efecto inhibitorio de la ehidroepiandrosterona (DHEA) sobre la síntesis de TGF-β a partir de células mononucleares periféricas (CMP) de pacientes con TB, estimuladas específicamente. A fin de conocer si dicha inhibición se relacionaba con un aumento en la apoptosis de células inmunocompetentes, se cultivaron CMP de Pacientes con TB y Controles, estimuladas con Mtb sonicado (Tso), a las que se les adicionó GC y DHEA. Pudo observarse que la estimulación con Tso indujo mayor apoptosis en las células provenientes de pacientes con TB, sin modificaciones tras la adición de GC y/o DHEA. Por las características de la TB humana, donde es difícil definir el tiempo transcurrido entre el contacto con la micobacteria y la manifestación clínica y a fin de lograr una mayor conocimiento al respecto se estudiaron individuos con exposición conocida, esto es, los Convivientes íntimos de pacientes bacilíferos sin signos y síntomas de enfermedad. In vitro, éste grupo presentó los niveles más altos de linfoproliferación al estimular con Tso, mientras que los pacientes los más descendidos, comportamiento que también se observó al cuantificar la producción de IFN-γ. Más aún, el co-cultivo de las CMP estimuladas específicamente, con GC y DHEA, mostró una inhibición en la síntesis de este mediador en todos los grupos, aunque los Convivientes continuaron presentando las mayores concentraciones. Citocinas inhibitorias de la respuesta inmune antituberculosa, como TGF-β e IL-6 presentan reconocida influencia sobre la síntesis de esteroides, este hecho y la inhibición observada en la síntesis de DHEA por parte de células de la línea adrenal NCI-H295R, producida por los sobrenadantes (SN) de cultivos de CMP, estimuladas con Tso, nos sugirieron que algunos de ellos podrían estar implicados en la inhibición de la síntesis de DHEA adrenal. Como el TGF-β se encontraba significativamente incrementado en el plasma de los pacientes se investigó el potencial efecto modulador del mismo sobre la síntesis de DHEA y GC en cultivos de la línea NCI-H295R.El tratamiento con SN de CMP estimuladas durante 36hs. con Tso inhibió la producción de DHEA, y ello fue revertido por la adición de anti-TGF-β 25:1. Sin embargo, frente a este tratamiento, la producción de GC aumentó. Pudo demostrarse el TGF-β es al menos uno de los responsables de la inhibición en la producción de DHEA por las células adrenales. Estos resultados originales contribuyen con nueva videncia para lograr un mejor conocimiento en cuanto a la comunicación neuroinmunoendócrina en TB
Estudio de factores de patogenicidad de cepas colonizantes e infectantes de Gardnerella vaginalis y su asociación con bacterias anaerobias
(2012) Belmonte, Adriana; Suttich, Emma
La Vaginosis Bacteriana (VB) es una patología del tracto genital inferior con mayor importancia en la etapa fértil de la mujer por el peligro de provocar Ruptura Prematura de Membrana durante la gestación y aumento de riesgo de la adquisición o propagación de infecciones por el HIV1, VHS2 y Papiloma virus. La etiología es polimicrobiana abarcando junto a Gardnerella vaginalis distintas especies de anaerobios incluyendo Micoplasmas. Ante el descubrimiento de distintos mecanismos de virulencia en Gardnerella vaginalis autores como Swidsinski y Gelber la señalan como patógeno iniciador de la VB. Los objetivos de esta tesis fueron investigar la expresión de la producción de enzimas como sialidasas y citolisinas, así como la capacidad de formar biofilm tanto en aislamientos de G. vaginalis provenientes de un grupo de pacientes con VB y en pacientes sanas, para ver si existen diferencias entre ambos grupos. Además conocer la coexistencia con Micoplasmas en cuanto a su tenor en ambas poblaciones, puesto que se trata de una patología polimicrobiana. Con esto se intenta incrementar nuestros conocimientos acerca del comportamiento de Gardnerella vaginalis, uno de los microorganismos que está señalado como principal involucrado en la patogenia de la Vaginosis Bacteriana. También nos da posibilidades de pensar estrategias para su prevención y tratamiento, e incluso implementar pruebas diagnósticas válidas, accesibles y rápidas que ayuden a hacer un diagnóstico de mayor certeza fundamentalmente en pacientes asintomáticas. En la primera etapa del estudio nos dedicamos a la inclusión de los casos y controles en base a los criterios clínicos de Amsel y microbiológicos del puntaje de Nugent, también se efectuó cultivo bacteriológico, el que nos permitió descartar otras patologías e incorporar casos de VB pura y controles sanos, asintomáticos; así como la detección de micoplasmas en ambos grupos. Al mismo tiempo se tomaron muestras de lavados vaginales (conservados a -70o C hasta el estudio posterior de producción de actividad sialidasa) y cada aislamiento de G. vaginalis se conservó a -70o C para realizar el estudio de factores de patogenicidad. En una segunda etapa se procedió a la medición de actividad sialidasa en los lavados vaginales mediante utilización de una técnica colorimétrica publicada por Cauci. En una tercera etapa se estudió la capacidad de producción de citolisina (tomando como referencia la metodología empleada por Rottini) y el estudio de la capacidad de formación de biofilm, que se llevó a cabo trabajando en microplacas de poliestireno (según la técnica descripta por Patterson). Se realizó un estudió epidemiológico de casos y controles (77 casos de VB y 77 controles) en una población original de 154 pacientes, para determinar si los factores de patogenicidad de G. vaginalis (producción de actividad sialidasa, citolisinas y formación de biofilm) y los micoplasmas implicados difieren en estos dos grupos. Se trabajó con un nivel de significación α del 5% y un poder ß del 80% y los resultados obtenidos fueron analizados estadísticamente mediante el test de U Mann Whitney para determinar si existe asociación entre las variables estudiadas. El análisis de los datos epidemiológicos se realizó calculando las razones de odds e intervalos de confianza. Las conclusiones tras la evaluación de los resultados fueron las siguientes: a) La incidencia de M. hominis y Ureaplasma spp. en la población sana fue de 1.3 y 9.1 % respectivamente, mientras que en la población con VB fue de 13 y 27.3%. Resultando el hallazgo de M. hominis estadísticamente significativo de VB (p<0.0001). b) La enzima sialidasa estuvo presente en el lavado vaginal de ambas poblaciones por lo que sugerimos un punto de corte de valores ≥ 5.5 nmoles de metoxifenol para su interpretación como índice de VB. La diferencia entre ambos grupos resultó significativa (p<0.0001) c) La capacidad de producción de citolisina no mostró diferencia significativa siendo los valores de unidades de hemólisis semejantes en ambos grupos (p=0,29). d) En lo referente a la producción de biofilm se encontró diferencia significativa entre el grupo control respecto del grupo con VB (p<0.0001) siendo de mayor magnitud en estos últimos aislamientos. Podría decirse que G. vaginalis tiene un potencial de virulencia innato y que los aislamientos provenientes de pacientes con VB tienen mayor capacidad para adherir que los de pacientes sanas. Por lo tanto al ser predominante su presencia, las enzimas que producirían como citolisina y sialidasas, actuarían sobre la mucosa favoreciendo la exfoliación y pérdida de células del epitelio vaginal. Todo esto torna más vulnerable al nicho ecológico vaginal para la adquisición de otras patologías. En cuanto al dosaje de sialidasa en fluido vaginal como método diagnóstico de VB, no es útil por si solo ya que puede haber pacientes con este síndrome con valores menores a 5,5 nmoles que es el punto de corte que proponemos.
Efecto de la osmolalidad sobre la habilidad fecundante del espermatozoide humano: un modelo de estudio in vitro
(2012) Caille, Adriana María; Munuce, María José
Las características funcionales del espermatozoide se modifican a medida que sobrelleva los procesos que lo preparan para adquirir su capacidad fecundante. La composición diferente de los fluidos de los tractos reproductivos masculino y femenino, le imprimirá una característica particular a cada espacio biológico. Como parte del proceso de adquisición de la capacidad fecundante, denominado “capacitación espermática”, se remueven moléculas absorbidas o integradas a la membrana plasmática, se dan cambios en la composición lipídica y aumento de la fluidez y permeabilidad de la membrana. Durante el ascenso hacia el ovocito, el espermatozoide interactúa con la superficie de las células epiteliales, los distintos productos de secreción del tracto y las cubiertas del ovocito. Estas interacciones participan en la modulación de la función espermática, en la adquisición de capacidad fecundante y en la coordinación del transporte y unión de los gametos femenino y masculino. Por otra parte, los espermatozoides pueden ser capacitados y consiguen expresar su habilidad fecundante in vitro. Una característica de los fluidos es su osmolalidad y está dada por la concentración de los componentes orgánicos e inorgánicos presentes en el mismo. Es por esto que la osmolalidad es una variable físico-química, de gran importancia en el metabolismo ntracelular, y depende tanto del tipo como de la concentración de los componentes que conforman a un fluido. Los fluidos fisiológicos, a los cuales están expuestos los espermatozoides en su tránsito hacia el sitio de la ecundación, presentan una osmolalidad variable en un rango importante (280 a 480 mOsmoles/kg). El volumen espermático estaría influenciado por el equilibrio del líquido a través de sus membranas y una falla en dicho equilibrio podría derivar en alteraciones de los mecanismos de capacitación y ecundación. Por otro lado, durante el manejo de los espermatozoides in vitro, ya sea durante las técnicas de reproducción asistida, como en los métodos utilizados para evaluar su capacidad fecundante, se utilizan medios y suplementos que pueden alterar la osmolalidad del medio en contacto con los espermatozoides. Es por todo esto que nuestro objetivo fué estudiar, la asociación entre la osmolalidad del medio al que se exponen los espermatozoides humanos y la adquisición de su capacidad fecundante, mediante un modelo de interacción in vitro.
Estudio del mecanismo de acción de monofluorofosfato de sodio sobre la remodelación ósea en ratas. Evaluación del efecto combinado con drogas anti-reabsortivas
(2014-03-15) Brance, María Lorena; Rigalli, Alfredo
La osteoporosis se caracteriza por pérdida de masa ósea con alteraciones en la microarquitectura ósea resultando en un aumento en el riesgo de fractura. Es conocido que el ácido zoledrónico (Z) disminuye la resorción ósea, mientras que el monofluorofosfato de sodio (MFP) aumenta la formación ósea. Se ha planteado la hipótesis que el efecto del MFP sería más efectivo sobre un hueso expuesto a alto estado de remodelación, debido a los factores de crecimiento liberados de la matriz ósea. Sobre esta hipótesis se evaluó el efecto de un tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico en ratas ovariectomizadas (OVX) con modificaciones simultáneas de la remodelación ósea empleando dietas con diferente contenido de calcio. Se utilizaron ratas Sprague Dawley de 7 semanas (n=7/grupo). Las ratas fueron ovariectomizadas, alimentadas con dieta hipocálcica por 30 días, tratadas con MFP y dieta hipercálcica por 60 días y finalmente con ácido zoledrónico y dieta hipercálcica (OVX.G3) hasta finalizar el tratamiento (150 días). Se realizaron controles: Sham: cirugía simulada, OVX: OVX sin tratamiento, OVX.G1: OVX con tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico pero con dieta normocálcica, OVX.G2: OVX con dieta hipo e hipercálcica sin tratamiento. Se realizaron mediciones bioquímicas de marcadoras de metabolismo óseo tanto plasmáticas como urinarias a 30, 90 y 150 días. Luego del sacrificio se extrajeron las tibias, en las cuales se realizó histomorfometría estática en tibia derecha y se analizó la morfometría y la densidad mineral ósea en tibia izquierda, y los fémures donde se realizaron determinaciones biomecánicas. A 30 días se halló una disminución del volumen óseo trabecular, un aumento de la fuerza de fractura cortical con disminución de la fuerza máxima trabecular en el grupo OVX alimentado con dieta normocálcica. El grupo OVX tratado con dieta hipocálcica demostró a 30 días un aumento del remodelado óseo, un incremento en el porcentaje de superficie erodada, mayor número de osteoclastos y menor fuerza de fractura trabecular. A 90 días no se hallaron diferencias en los parámetros istomorfométricos ni en las variables biomecánicas entre los diferentes grupos. A 150 días el grupo que recibió dieta hipo e hipercálcica y tratamiento con MFP y ácido zoledrónico presentó disminución del remodelado óseo, aumento de la densidad mineral ósea y aumento del volumen óseo trabecular a expensas de un aumento del número de trabéculas. Estos resultados se reflejaron en un aumento de la fuerza de fractura a la compresión y un aumento de la rigidez del hueso trabecular. A nivel cortical se observó un aumento en la fuerza de fractura. Las modificaciones en los parámetros mencionados no fueron observadas en los grupos controles. Se concluye que el tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico es más efectivo con la combinación de dietas hipo e hipercálcica que el tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico sobre un hueso sin remodelado óseo aumentado.
Mediciones inmunoendócrinas y su aplicabilidad para el seguimiento clínico del paciente con tuberculosis pulmonar.
(2015) Diaz, Ariana; Bay, María Luisa; Bongiovanni, Bettina
La tuberculosis (TB) constituye un importante problema de Salud Pública, es la segunda causa de muerte a nivel mundial producida por un agente infeccioso, el Mycobacterium tuberculosis (Mtb). La respuesta inmune (RI) celular es esencial para el control de esta enfermedad, aunque también está involucrada en la generación de patología. En trabajos previos se observó que al momento del diagnóstico los pacientes con TB presentaban un marcado desequilibrio Nueroinmunoendócrino caracterizado por aumento plasmático de citocinas pro- y antiinflamatorias y deterioro de la RI celular, conjuntamente con incrementos en los niveles de cortisol y marcado descenso de los de dehidroepiandrosterona (DHEA), y el consecuente desequilibrio de la relación Cortisol/DHEA en asociación con la severidad de la patología. Con respecto a las funciones de las hormonas del eje Hipotalámico-Pituitario-Adrenal como reguladores extrínsecos de la RI, el cortisol inhibe la RI celular y la producción de citocinas proinflamatorias, mientras que DHEA por su parte posee efecto antiinflamatorio, e inmunoestimulante sobre la respuesta Th1. Ante lo previamente expuesto y atendiendo al rol estimulante de la DHEA sobre la RI celular protectora hacia patógenos intracelulares como el Mtb, se consideró esencial: Investigar la respuesta inmunoendócrina en pacientes, desde su diagnóstico hasta la culminación del tratamiento, a fin de establecer el correlato entre los parámetros clínicos y de laboratorio (hormonas, citocinas, proteínas de fase aguda, modificaciones de las distintas poblaciones linfocitarias -T reguladoras-). Al mismo tiempo, determinar si alguno(s) de los parámetros inmunoendócrinos bajo análisis se desempeñan como predictores de la posterior evolución de la enfermedad. Es así que se obtuvieron muestras de sangre de 26 controles sanos (HCo) y 24 sujetos con TB, HIV negativos, similares en sexo y edad. En los pacientes las extracciones se realizaron al diagnóstico (T0) y a los 2 (T2), 4 (T4) y 6 meses (T6) de iniciado el tratamiento antibacilar, y a los 3 meses de finalizado el mismo (T9). Al T0 en los enfermos se observó un incremento en los niveles plasmáticos de IL-6, CRP, IFN-γ y TGF-β. Durante el tratamiento específico estos mediadores escendieron hasta alcanzar valores similares a los presentados por los HCo. Conjuntamente se observó aumento en la respuesta linfoproliferativa a la par de una significativa mejoría clínica, caracterizada por el incremento en el índice de masa corporal (IMC). La proporción de células T-reg, elevada al diagnóstico se vio aún más incrementada al T2 y T4, donde se correlacionó negativamente con los niveles plasmáticos de INF-γ, para luego descender a valores similares al de los HCo. Al igual que en trabajos previos, al diagnóstico los voluntarios enfermos mostraron niveles bajos de DHEA y DHEA-S y valores elevados de cortisol así como de la relación Cortisol/DHEA, los últimos asociados a la severidad de la TB pulmonar. Además, presentaron una relación entre los transcriptos de las isoformas α y β del receptor para glucocorticoides (GR) disminuida (GRα es la isoforma biológicamente activa, no así GRβ), sugiriendo cierto grado de resistencia a la acción del esteroide; puesto de manifiesto también por el incremento en la expresión del transcripto de la enzima 11-beta Hidroxiesteroide Deshidrogenasa tipo 1 (11βHSD1), en un intento de aumentar la disponibilidad del cortisol intracelular. Durante el tratamiento específico se vio un incremento en los niveles plasmáticos de DHEA junto con niveles moderadamente elevados y sostenidos de cortisol y una disminución en la relación Cortisol/DHEA, lo que podría reflejar un mejor funcionamiento suprarrenal. Además el aumento a partir de T2 de la relación entre los transcriptos GRα/GRβ, con marcada disminución de GRβ, favorecería la acción de los GC contribuyendo a la modulación de la respuesta proinflamatoria. De lo expuesto se desprende que el tratamiento antibacilar involucraría cambios cualitativos en el perfil inmunoendócrino que en su conjunto contribuirían a la mejoría clínica del paciente. Como perspectivas futuras los resultados permiten presuponer que la incorporación de DHEA al tratamiento convencional antibacilar contribuiría a acortar los tiempos requeridos para lograr la mejoría clínica del paciente. Asimismo, se ha podido vislumbrar el rol de la variable Cortisol/DHEA como un potencial marcador proinflamatorio. Ante el eventual uso de DHEA como coadyuvante de la terapia antibacilar, esta relación podría ser una herramienta útil como marcador de pronóstico.
Interacción entre glucocorticoides y células T reguladoras durante la infección chagásica. Estudios celulars y moleculasrs.
(2015) Fernandez Bussy, Rodrigo; Perez, Ana Rosa
El desenlace de la infección por Trypanosoma cruzi (T. cruzi) es el resultado de una compleja serie de interacciones donde los mismos mecanismos que se ponen en marcha para contener al parásito son también capaces de inducir daño tisular. En función de ello es evidente que el desarrollo de la respuesta anti-infecciosa estará acompañado de una respuesta reguladora inmuno- endócrina orientada a reducir las consecuencias patológicas de esta tripanosomiasis. En este proceso de auto-control podrían tener un papel particular las células T reguladoras (Tregs) y los glucocorticoides (GCs). Los linfocitos Tregs CD4+FoxP3+ constituyen una población inmunosupresora que puede actuar sobre poblaciones efectoras por contacto directo o mediante la secreción de citocinas inmunoreguladoras. Por otra parte, las citocinas pro-inflamatorias producidas durante un proceso inflamatorio o infeccioso, activan el eje hipotálamo pituitario adrenal (HPA) con la consiguiente liberación de GCs, los que ejercen efectos inmunosupresores sobre la respuesta inmune. A su vez Los GCs podrían favorecer el desarrollo de las Tregs durante procesos nflamatorios, sin embargo esta posibilidad no se ha investigado en profundidad en procesos infecciosos. En nuestro laboratorio se han caracterizado dos modelos de infección experimental murina con T. cruzi que muestran una diferente resolución de la enfermedad aguda. Mientras que los animales C57BL/6 presentan un 100% de mortalidad como consecuencia de una respuesta inflamatoria exacerbada, la cepa BALB/c es parcialmente resistente a la infección y exhibe una respuesta defensiva más balanceada. El objetivo de este trabajo fue evaluar el papel que las Tregs podrían desempeñar en el patrón de susceptibilidad/resistencia previamente observado y en las alteraciones inmunológicas que tienen lugar a nivel tímico durante la infección con T. cruzi. Los estudios también apuntaron a analizar la relación que se establece entre las células Tregs y los GCs, como así también a la manipulación de la población Treg como potencial estrategia inmuno-moduladora en la infección chagásica. Los resultados obtenidos indican que el perfil de resistencia observado en los animales BALB/c se asocia a mayores niveles basales de Tregs en la periferia y a una expansión más eficiente de esta población, lo cual se refleja en un mejor balance homestático entre células Treg y células T efectoras (Tef). Por el contrario, en los animales C57BL/6, la mayor susceptibilidad se asocia a un cierto grado de parálisis de la población de células Tregs, lo cual sugiere que los mecanismos supresores serían largamente superados por la respuesta efectora. Además, y en relación a esto último, mostramos que los GCs endógenos serían necesarios para mantener el balance Tef/Treg durante el curso de la infección. Por último, revelamos que la administración de Dex+IL-2 puede modular positivamente el balance Tef/Treg e influenciar de forma diferencial el curso de la infección. Estudios futuros que recurran a esta estrategia permitirían optimizar terapias que expanden específicamente a las Tregs en otros contextos inflamatorios.
Inmunidad y esteroides sexuales en la tuberculosis estudios clínicos y experimentales
(2015-09-10) Bini, Estela Isabel; Bottasso, Oscar; Hernandez Pando, Rogelio
La relación entre hombres y mujeres en cuanto al padecimiento de la tuberculosis pulmonar es 7/3 a favor de los primeros. Las hormonas sexuales pueden ser un factor a tener en cuenta en esta diferencia, dado los efectos inhibitorios de la testosterona sobre la activación de macrófagos y la producción de citocinas pro-inflamatorias, mientras que los estrógenos son más proclives a inducir la producción de estos mediadores. En función de estas cuestiones, en una primera etapa el presente trabajo de tesis estuvo orientado a comparar la evolución de la tuberculosis en ratones machos y hembras en base a la utilización de un modelo de enfermedad progresiva. Ratones BALB/c, machos y hembras se asignaron al azar en dos grupos: castrados o con operación simulada y se infectaron por vía intratraqueal con una alta dosis de la cepa de Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Los ratones fueron sacrificados a diferentes momentos y en sus pulmones se determinaron la carga bacilar, la reacción inflamatoria, expresión de ARN mensajeros para diferentes citocinas, la supervivencia y niveles de testosterona en suero. Los ratones machos no castrados mostraron mayor mortalidad y carga bacilar durante la enfermedad avanzada respecto de las hembras y machos castrados. En comparación con los machos sin manipular, las hembras y machos castrados mostraron una mayor inflamación en todos los compartimentos de pulmón, como así también una reacción granulomatosa y desarrollo de neumonía más precoz, mientras que entre los orquitectomizados y las hembras no hubo diferencias significativas. Las hembras y machos castrados mostraron una mayor expresión de mARN para TNFα, IFNγ, IL-12, iNOS e IL-17 respecto de los machos no castrados, durante el primer mes de la infección. Los niveles de testosterona de los machos se hallaron aumentados durante la infección tardía. La orquitectomía al día 60 post-infección produjo una disminución significativa de la carga bacilar en coexistencia con una mayor expresión de TNFα, IL-12 e IFNγ. Resulta claro que en el modelo analizado, los ratones machos resultaron más susceptibles a la tuberculosis y este fenómeno fue revertido por la castración lo cual habla del rol de la testosterona en este déficit de la respuesta defensiva. La lógica para el estudio en pacientes tuberculosos se contextualizó en torno a la naturaleza crónica de la tuberculosis y la reacción inflamatoria acompañante la cual está implicada en una serie de cambios metabólicos e inmuno-endócrinos típicos de la enfermedad. Para profundizar en torno a esta problemática nos propusimos explorar en primer término las variaciones en cuanto a los componentes del eje hipotálamo-hipofisario- gonadal y su relación con las citocinas claramente inmunopatológicas en tuberculosis, en pacientes varones con enfermedad activa. Se utilizaron muestras de plasma de 36 casos no tratados con TB pulmonar, HIV negativos en quienes se determinaron los niveles de TNFα, IFNγ, TGF-β, IL-6, cortisol, dehidroepiandrosterona, testosterona, progesterona, estradiol, hormona luteinizante (LH) y la hormona folículo-estimulante (por ELISA), en simultáneo con 21 voluntarios sanos sin contacto con pacientes tuberculosos y edad similar (media general 40 ± 16.8 años, desvío estándar). Los pacientes mostraron disminución de los niveles de testosterona en presencia de altas cantidades de LH, junto con concentraciones aumentadas de IFNγ, IL-6 y TGF-β. Dado que esta disociación entre LH elevada y testosterona descendida sugería la existencia de algún fenómeno inhibitorio a nivel gonadal, se procesaron muestras histológicas testiculares de necropsias de pacientes que mueren de tuberculosis para la inmunomarcación de IL-1β, TNFα, IL-6 e IFNγ, habida cuenta que estas citocinas podría interferir con la síntesis de esteroides. Secciones histológicas testiculares mostraron abundante presencia de IL-1β, TNFα, IL-6 e IFNγ en macrófagos intersticiales, células de Sertoli y algunas espermatogonias. A partir de esta evidencia se decidió trabajar con células de Leydig murinas (línea celular TM3) la cual fue expuesta a diferentes concentraciones de citocinas de ratón relevantes en la inmunopatología de la tuberculosis como TNFα, IFNγ TGF-β. En el tratamiento in vitro de células de Leydig con estas citocinas condujo a una notable reducción de la producción de testosterona. Ello pone de relieve las implicancias de la respuesta inflamatoria sobre la síntesis de esteroides gonadales con todas las eventuales repercusiones que esto podría tener en torno a las acciones de este andrógeno sea como hormona anti-inflamatoria, inmunomoduladora, anabólica y obviamente de la reproducción.
Modulación inmuno-endócrina y metabólica en la infección por Trypanosoma cruzi
(2017-05-11) González, Florencia Belén; Pérez, Ana Rosa
A lo largo de la evolución, los mamíferos han desarrollado una serie de respuestas fisiológicas que resultan en la contención el agente patógeno. La fuerte interconexión entre el sistema neuroendócrino y el sistema inmunológico, no sólo optimiza la respuesta defensiva, sino que también puede verse desregulado cuando el patógeno no puede eliminarse, y cuyo resultado suele ser el daño tisular. A nivel experimental, los resultados obtenidos en este trabajo indican que la respuesta inmune excesiva que tiene lugar durante la infección con T. cruzi en los animales C57BL/6 promueve un contexto endócrino-metabólico claramente desfavorable. Como resultado del desbalance inmuno- endócrino y metabólico, se observan importantes cambios catabólicos que resultan en una marcada reducción del peso corporal, una marcada hipoglicemia, un deterioro general del animal y en una letalidad del 100%. Por otra parte, la drástica pérdida de TA que se produce durante la infección está asociada con el fracaso de la respuesta inmune, ya que no se logra controlar el crecimiento parasitario. En este contexto, la disminución de la expresión en el TA de adiponectina y PPAR-γ, contribuiría a perpetuar el fenotipo inflamatorio y el daño tisular. El efecto de los agonistas PPAR-γ resultó poco efectivo durante la infección en términos de control de la respuesta inflamatoria a nivel tisular y sobre el curso de la infección. Nuestro estudio también indica que en la Enfermedad de Chagas crónica humana hay alteraciones en el eje HPA, lo cual resultaría en un control deficiente del componente inflamatorio y el daño tisular que afecta principalmente al miocardio. La naturaleza inflamatoria de la MCC y los datos que apuntan a un aumento en el IMC y el ICC, el índice HOMA-IR y en los niveles de insulina y glicemia de los pacientes chagásicos, hace difícil aseverar hasta qué punto los niveles de leptina (y otros mediadores metabólicos) se relacionarían con el desequilibrio energético o con el proceso inmune crónico que subyace a la infección. Si se puede afirmar que el sobrepeso y sus consecuencias inmuno-metabólicas son un factor importante a tener en cuenta a la hora de evaluar esta población ya que es una comorbilidad predominante en la población de Chagas urbanizado y podría influir en el agravamiento de la patología cardíaca.
Transporte a través de membranas biológicas
(2017-05-14) Rigalli, Alfredo; Alejo Ferrer
Estudio de casos y controles de Enfermedad Colelitiásica (EC) y su relación con la alimentación
(2017-09-01) Bértola Compagnucci, Agustina; Pezzotto, Stella Maris
Con el objetivo de determinar el riesgo de Enfermedad Colelitiásica (EC) en relación con los distintos factores alimentarios y con los tradicionales factores de riesgo, se llevó a cabo un estudio de casos y controles anidado a uno de prevalencia llevado a cabo en la ciudad de Rosario entre los años 1989 y 1993. Los casos son los participantes a quienes se les detectó la enfermedad en el estudio de prevalencia. Los controles fueron participantes del estudio de prevalencia a quienes se les realizó una ecografía de abdomen, para descartar la presencia de cálculos asintomáticos. A todos los participantes se les realizó una encuesta utilizando un cuestionario de frecuencia de consumo para recolectar información sobre su alimentación habitual cinco años antes del diagnóstico para los casos y habitual para los controles. Aplicando modelos lineales generales se calcularon las diferencias de consumo de los diferentes grupos de alimentos y nutrientes, a través de análisis de componentes principales se determinaron patrones de consumo y mediante análisis de regresión logística múltiple se realizaron las estimaciones de riesgos. Los casos consumieron más energía, lípidos, ácidos grasos monoinsaturados, grasas totales, pollo con piel y fiambres y embutidos que los controles. Por el contrario, la ingesta de proteínas, fibra insoluble, calcio, fósforo, vitamina A y K, otros vegetales, vegetales rojos y amarillos, vegetales totales, otras frutas, frutas frescas totales, frutas secas, pollo sin piel, lácteos descremados, lácteos totales y café fueron mayores en los controles. Al realizar los análisis de riesgo, los consumos de lípidos, carne de cerdo, carne vacuna grasa, pollo con piel, el valor calórico total y ser mujer, se comportaron como factores de riesgo. En cambio, las ingestas de vegetales rojos y amarillos, frutas secas, fósforo y el hecho de realizar cinco o más comidas al día se comportaron como factores de protección. Pudieron determinarse dos patrones de consumo, uno “Poco saludable” y otro “Saludable”. En el análisis de riesgo, el primero resultó promotor de la enfermedad y segundo, protector.
Estudio de prevalencia de factores de riesgo cardiovasculares en la ciudad de Funes Santa Fe, Argentina
(2017-11-17) Lamas, Carlos; Beloscar, Juan
Objetivo: Estimar la prevalencia de factores de riesgo cardiovasculares en personas mayores de 18 años en la ciudad de Funes. Métodos:Se realizó un diseño descriptivo, transversal y observacional. De una muestra aleatoria, se reclutaron entre Setiembre 2011 y Diciembre 2014, 379 personas (173 varones y 206 mujeres) a quienes se administró cuestionario de factores de riesgo, toma de tensión arterial,medidas antropométricas, y determinaciones de glicemia y lípidos sanguíneos. Resultados: El 3,43 % de la muestra tenía enfermedad cardiovascular previa. La prevalencia de hipertensión arterial fue de 37,7 (32,9 – 42,5). La prevalencia de diabetes fue 8,4% (5,64 - 11,16). La prevalencia de hipercolesterolemia fue 35,1% (30,3 - 39,8). La prevalencia de tabaquismo fue 30,1% (25,5 - 34,7). La prevalencia de sobrepeso/obesidad fue 71,2% (66,7 - 75,7). El 48,5% (43,5 - 53,5) eran sedentarios. El 46,8% (39,4 - 54,2) de varones tuvieron perímetro de cintura mayor a 102 cm. y 49,8% (43,0 - 56,6) de mujeres mayor a 88 cm. Conclusiones: La prevalencia de factores de riesgo cardiovasculares es alta en la población mayor de 18 años de la ciudad de Funes. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas para hipertensión arterial, taba- quismo, diabetes y sedentarismo, comparados con la encuesta nacional de factores de riesgo 2013 para la región. No se pudieron comparar perímetro de cintura (no se midió en la encuesta nacional) y dislipidemias (se tomaron distintos criterios para su categorización) y la prevalencia de sobrepeso y obesidad fue más alta en la muestra, alcanzando esto último significación estadística.
TablaR3-4
(2018-07) Rigalli, Alfredo
TablaR3-2
(2018-07) Rigalli, Alfredo
TablaR3-5
(2018-07) Rigalli, Alfredo

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