Examinando por Autor "Marrone, Julieta"
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Ítem Acceso Abierto Adenoviral transfer of human Aquaporin-8 gene to mouse liver improves ammonia-derived ureagenesis(MDPI, 2023-06-02) Capiglioni, Alejo M.; Capitani, María Celeste; Marrone, Julieta; Marinelli, Raúl A.We previously reported that, in cultured hepatocytes, mitochondrial aquaporin-8 (AQP8) channels facilitate the conversion of ammonia to urea and that the expression of human AQP8 (hAQP8) enhances ammonia-derived ureagenesis. In this study, we evaluated whether hepatic gene transfer of hAQP8 improves detoxification of ammonia to urea in normal mice as well as in mice with impaired hepatocyte ammonia metabolism. A recombinant adenoviral (Ad) vector encoding hAQP8, AdhAQP8, or a control Ad vector was administered via retrograde infusion into the bile duct of the mice. Hepatocyte mitochondrial expression of hAQP8 was confirmed using confocal immunofluorescence and immunoblotting. The normal hAQP8-transduced mice showed decreased plasma ammonia and increased liver urea. Enhanced ureagenesis was confirmed via the NMR studies assessing the synthesis of 15N-labeled urea from 15N-labeled ammonia. In separate experiments, we made use of the model hepatotoxic agent, thioacetamide, to induce defective hepatic metabolism of ammonia in mice. The adenovirus-mediated mitochondrial expression of hAQP8 was able to restore normal ammonemia and ureagenesis in the liver of the mice. Our data suggest that hAQP8 gene transfer to mouse liver improves detoxification of ammonia to urea. This finding could help better understand and treat disorders with defective hepatic ammonia metabolism.Ítem Acceso Abierto Adenovirus-mediated human aquaporin-1 expression in hepatocytes improves lipopolysaccharide-induced cholestasis(John Wiley & Sons Inc, 2017-12) Marrone, Julieta; Danielli, Mauro; Gaspari, César Ismael; Marinelli, Raúl A.; http://orcid.org/0000-0003-2934-8863Lipopolysaccharides (LPS) are known to cause cholestasis in sepsis. There is evidence that a defective expression of canalicular aquaporin water channels contributes to bile secretory failure in LPS-induced cholestasis. Thus, we studied whether the hepatic adenovirus-mediated transfer of human aquaporin-1 gene (haqp1) can improve the cholestasis induced by LPS. Adenoviral vector encoding hAQP1 (AdhAQP1) or control vector was administered to rats by retrograde intrabiliary infusion. Hepatocyte canalicular hAQP1 expression was assessed by liver immunostaining and immunoblotting in purified plasma membranes. LPS reduced bile flow and biliary bile acid excretion by 30% and 45%, respectively. AdhAQP1-treatment normalized both bile flow and biliary bile acid excretion in LPS-induced cholestasis. Moreover, markedly elevated serum bile acid levels in cholestatic rats, were also normalized with the AdhAQP1 hepatic transduction. Bile flow and serum or biliary bile acids in normal rats were not significantly altered by AdhAQP1. AdhAQP1 delivery unaffected the downregulated protein expression of canalicular bile salt export pump (BSEP/ABCB11) in cholestasis, but improved its transport activity restoring reduced canalicular cholesterol content. Our data suggest that the adenovirus-mediated hepatocyte hAQP1 expression improves LPS-induced cholestasis in rats by stimulating the BSEP/ABCB11-mediated biliary bile acid excretion; a finding that might contribute to the understanding and treatment of sepsis-associated cholestatic diseases.Ítem Acceso Abierto Data of H2O2 release from AQP8-knockdown rat hepatocyte mitochondria(Elsevier, 2019-03-06) Danielli, Mauro; Marrone, Julieta; Capiglioni, Alejo M.; Marinelli, Raúl A.Ítem Acceso Abierto Transferencia génica de aquaporinas al hígado de rata: Modulación de los mecanismos de secreción biliar en colestasis(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2016-07-01) Marrone, Julieta; Marinelli, Raúl A.Las aquaporinas (AQPs) conforman una familia de canales de membrana que facilitan el movimiento rápido de agua acoplado a gradientes osmóticos generados por el transporte de solutos. La primer AQP (i.e., AQP1) fue identificada en el año 1992 por el Dr. Peter Agre, quien fue galardonado con el Premio Nobel en Química 2003. Hasta el presente, se han identificado trece AQPs en mamíferos, distribuidas en una amplia variedad de células, incluyendo el hepatocito. Los hepatocitos son responsables de la formación de la secreción biliar primaria o canalicular. La generación de la bilis es un proceso osmótico impulsado por el transporte de solutos (principalmente sales biliares) y por el flujo obligado de agua. De esta manera, la secreción biliar depende del gradiente osmótico generado por el transporte activo de solutos en la membrana canalicular del hepatocito (polo secretorio biliar) y además, de la permeabilidad canalicular al agua determinada por el nivel de expresión de AQPs. Así, una defectiva expresión canalicular de AQPs y en consecuencia una reducida permeabilidad de membrana al agua, como hemos observado en animales con colestasis hepatocelular, se considera un importante factor contribuyente a la falla secretoria biliar. Sobre esta base, el principal objetivo del presente trabajo de Tesis fue evaluar en un modelo animal de colestasis hepatocelular inducida por el estrógeno 17α-etinilestradiol, si la normalización de la permeabilidad canalicular al agua vía transferencia génica in vivo de AQPs, incrementa el flujo biliar y atenúa el cuadro colestásico. Los resultados aquí presentados muestran que la administración retrobiliar del vector adenoviral AdhAQP1, que codifica para la aquaporina-1 humana (hAQP1), a ratas colestásicas induce la expresión de hAQP1 en la membrana canalicular de los hepatocitos, el polo secretorio biliar. La expresión canalicular de hAQP1 indujo un aumento significativo de la permeabilidad osmótica al agua que se tradujo en una mayor eficiencia colerética de las sales biliares excretadas a bilis y por consiguiente en una corrección del flujo biliar canalicular en colestasis. La hAQP1 canalicular también indujo una normalización de la excreción biliar de las sales biliares y de sus niveles séricos aumentados, que es considerado un marcador clave de colestasis hepatocelular. Demostramos que estos efectos serían debidos a un aumento significativo de la actividad del transportador canalicular de sales biliares, transportador de sales biliares BSEP/ABCB11, la cual está deprimida en colestasis. La hAQP1 canalicular indujo la relocalización específica del BSEP en microdominios rafts ricos en colesterol que mantienen su actividad transportadora. En conclusión, nuestros resultados reafirman el importante rol de las AQPs en el proceso de formación de la secreción biliar y sugiere a la transferencia adenoviral de hAQP1 como una posible estrategia terapéutica para cuadros de colestásicos hepatocelular.