Sistema reportero para estudiar la interacción del péptido señal del sistema TAT con componentes del sistema de transporte

En biotecnología, el estudio de los sistemas de secreción de proteínas en bacterias ha adquirido gran relevancia debido a su papel fundamental en numerosos procesos celulares. Uno de los sistemas de secreción más destacados es el sistema Tat (Twin-Arginine Translocation), el cual desempeña un rol crucial en la exportación de proteínas plegadas al periplasma bacteriano. La comprensión de este sistema y su aplicación en diversos campos, como la ingeniería de proteínas y la producción de biomoléculas, ha despertado un creciente interés en la comunidad científica. El sistema Tat es un sistema de transporte altamente conservado, presente en bacterias Gram negativas y Gram positivas, así como en algunas arqueas y plantas. A diferencia de otros sistemas de secreción, como el sistema Sec, el sistema Tat tiene la capacidad de exportar proteínas plegadas en su conformación nativa. Esto lo convierte en un sistema de transporte único y sumamente eficiente. En E. coli, el sistema Tat está compuesto por tres proteínas integrales de membrana: TatA, TatB y TatC. Mientras que en Gram positivos, como Bacillus subtilis, solamente está formado por TatA y TatC. Estas proteínas trabajan en conjunto para reconocer y transportar selectivamente las proteínas hacia el periplasma bacteriano. Aunque se ha logrado un progreso significativo en la caracterización de estos componentes, aún existen muchos aspectos que requieren una investigación más profunda. En el presente trabajo de tesina se diseñaron los procesos de obtención de dos proteínas recombinantes en E. coli: SUMO-eGFP (enhanced Green Fluorescent Protein) y SUMO-sp-eGFP (signal peptide eGFP). La presencia de SUMO (Small Ubiquitin-like MOdifier) protege al péptido señal Tat durante la purificación y, posteriormente, puede ser escindido utilizando la SUMO proteasa (Ulp1) para exponer el péptido señal y evaluar su interacción con componentes del sistema Tat y la chaperona molecular DnaK. Se llevaron a cabo la obtención y el clonado de los genes tatB y tatC de E. coli, y la posterior expresión y purificación del producto de este gen, el complejo TatBC. Se intentó observar cómo interactúan con el péptido señal Tat empleando ensayos de pull down y cromatografía de exclusión molecular.