FCM - Doctorado en Ciencia Biomédicas
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Examinando FCM - Doctorado en Ciencia Biomédicas por Autor "Bay, María Luisa"
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Ítem Acceso Abierto Estudios moleculares y funcionales en células mononucleares de pacientes con Tuberculosis pulmonar, estimuladas in vitro con Mycobacterium tuberculosis y tratadas con Cortisol y/o Dehidroepiandrosterona(2011) Bozza, Verónica Vanina; Bay, María LuisaLa tuberculosis (TB) constituye la enfermedad infectocontagiosa que mayor número de muertes causa en el mundo. Su curso no depende sólo de la activación del Sistema Inmune sino también de su interacción con otros Sistemas como el Neuroendócrino. En trabajos previos demostramos la inhibición provocada por el Cortisol (GC), tanto en la blastogénesis como en la producción de IFN-γ y TNF-α, y el efecto inhibitorio de la ehidroepiandrosterona (DHEA) sobre la síntesis de TGF-β a partir de células mononucleares periféricas (CMP) de pacientes con TB, estimuladas específicamente. A fin de conocer si dicha inhibición se relacionaba con un aumento en la apoptosis de células inmunocompetentes, se cultivaron CMP de Pacientes con TB y Controles, estimuladas con Mtb sonicado (Tso), a las que se les adicionó GC y DHEA. Pudo observarse que la estimulación con Tso indujo mayor apoptosis en las células provenientes de pacientes con TB, sin modificaciones tras la adición de GC y/o DHEA. Por las características de la TB humana, donde es difícil definir el tiempo transcurrido entre el contacto con la micobacteria y la manifestación clínica y a fin de lograr una mayor conocimiento al respecto se estudiaron individuos con exposición conocida, esto es, los Convivientes íntimos de pacientes bacilíferos sin signos y síntomas de enfermedad. In vitro, éste grupo presentó los niveles más altos de linfoproliferación al estimular con Tso, mientras que los pacientes los más descendidos, comportamiento que también se observó al cuantificar la producción de IFN-γ. Más aún, el co-cultivo de las CMP estimuladas específicamente, con GC y DHEA, mostró una inhibición en la síntesis de este mediador en todos los grupos, aunque los Convivientes continuaron presentando las mayores concentraciones. Citocinas inhibitorias de la respuesta inmune antituberculosa, como TGF-β e IL-6 presentan reconocida influencia sobre la síntesis de esteroides, este hecho y la inhibición observada en la síntesis de DHEA por parte de células de la línea adrenal NCI-H295R, producida por los sobrenadantes (SN) de cultivos de CMP, estimuladas con Tso, nos sugirieron que algunos de ellos podrían estar implicados en la inhibición de la síntesis de DHEA adrenal. Como el TGF-β se encontraba significativamente incrementado en el plasma de los pacientes se investigó el potencial efecto modulador del mismo sobre la síntesis de DHEA y GC en cultivos de la línea NCI-H295R.El tratamiento con SN de CMP estimuladas durante 36hs. con Tso inhibió la producción de DHEA, y ello fue revertido por la adición de anti-TGF-β 25:1. Sin embargo, frente a este tratamiento, la producción de GC aumentó. Pudo demostrarse el TGF-β es al menos uno de los responsables de la inhibición en la producción de DHEA por las células adrenales. Estos resultados originales contribuyen con nueva videncia para lograr un mejor conocimiento en cuanto a la comunicación neuroinmunoendócrina en TBÍtem Acceso Abierto Mediciones inmunoendócrinas y su aplicabilidad para el seguimiento clínico del paciente con tuberculosis pulmonar.(2015) Diaz, Ariana; Bay, María Luisa; Bongiovanni, BettinaLa tuberculosis (TB) constituye un importante problema de Salud Pública, es la segunda causa de muerte a nivel mundial producida por un agente infeccioso, el Mycobacterium tuberculosis (Mtb). La respuesta inmune (RI) celular es esencial para el control de esta enfermedad, aunque también está involucrada en la generación de patología. En trabajos previos se observó que al momento del diagnóstico los pacientes con TB presentaban un marcado desequilibrio Nueroinmunoendócrino caracterizado por aumento plasmático de citocinas pro- y antiinflamatorias y deterioro de la RI celular, conjuntamente con incrementos en los niveles de cortisol y marcado descenso de los de dehidroepiandrosterona (DHEA), y el consecuente desequilibrio de la relación Cortisol/DHEA en asociación con la severidad de la patología. Con respecto a las funciones de las hormonas del eje Hipotalámico-Pituitario-Adrenal como reguladores extrínsecos de la RI, el cortisol inhibe la RI celular y la producción de citocinas proinflamatorias, mientras que DHEA por su parte posee efecto antiinflamatorio, e inmunoestimulante sobre la respuesta Th1. Ante lo previamente expuesto y atendiendo al rol estimulante de la DHEA sobre la RI celular protectora hacia patógenos intracelulares como el Mtb, se consideró esencial: Investigar la respuesta inmunoendócrina en pacientes, desde su diagnóstico hasta la culminación del tratamiento, a fin de establecer el correlato entre los parámetros clínicos y de laboratorio (hormonas, citocinas, proteínas de fase aguda, modificaciones de las distintas poblaciones linfocitarias -T reguladoras-). Al mismo tiempo, determinar si alguno(s) de los parámetros inmunoendócrinos bajo análisis se desempeñan como predictores de la posterior evolución de la enfermedad. Es así que se obtuvieron muestras de sangre de 26 controles sanos (HCo) y 24 sujetos con TB, HIV negativos, similares en sexo y edad. En los pacientes las extracciones se realizaron al diagnóstico (T0) y a los 2 (T2), 4 (T4) y 6 meses (T6) de iniciado el tratamiento antibacilar, y a los 3 meses de finalizado el mismo (T9). Al T0 en los enfermos se observó un incremento en los niveles plasmáticos de IL-6, CRP, IFN-γ y TGF-β. Durante el tratamiento específico estos mediadores escendieron hasta alcanzar valores similares a los presentados por los HCo. Conjuntamente se observó aumento en la respuesta linfoproliferativa a la par de una significativa mejoría clínica, caracterizada por el incremento en el índice de masa corporal (IMC). La proporción de células T-reg, elevada al diagnóstico se vio aún más incrementada al T2 y T4, donde se correlacionó negativamente con los niveles plasmáticos de INF-γ, para luego descender a valores similares al de los HCo. Al igual que en trabajos previos, al diagnóstico los voluntarios enfermos mostraron niveles bajos de DHEA y DHEA-S y valores elevados de cortisol así como de la relación Cortisol/DHEA, los últimos asociados a la severidad de la TB pulmonar. Además, presentaron una relación entre los transcriptos de las isoformas α y β del receptor para glucocorticoides (GR) disminuida (GRα es la isoforma biológicamente activa, no así GRβ), sugiriendo cierto grado de resistencia a la acción del esteroide; puesto de manifiesto también por el incremento en la expresión del transcripto de la enzima 11-beta Hidroxiesteroide Deshidrogenasa tipo 1 (11βHSD1), en un intento de aumentar la disponibilidad del cortisol intracelular. Durante el tratamiento específico se vio un incremento en los niveles plasmáticos de DHEA junto con niveles moderadamente elevados y sostenidos de cortisol y una disminución en la relación Cortisol/DHEA, lo que podría reflejar un mejor funcionamiento suprarrenal. Además el aumento a partir de T2 de la relación entre los transcriptos GRα/GRβ, con marcada disminución de GRβ, favorecería la acción de los GC contribuyendo a la modulación de la respuesta proinflamatoria. De lo expuesto se desprende que el tratamiento antibacilar involucraría cambios cualitativos en el perfil inmunoendócrino que en su conjunto contribuirían a la mejoría clínica del paciente. Como perspectivas futuras los resultados permiten presuponer que la incorporación de DHEA al tratamiento convencional antibacilar contribuiría a acortar los tiempos requeridos para lograr la mejoría clínica del paciente. Asimismo, se ha podido vislumbrar el rol de la variable Cortisol/DHEA como un potencial marcador proinflamatorio. Ante el eventual uso de DHEA como coadyuvante de la terapia antibacilar, esta relación podría ser una herramienta útil como marcador de pronóstico.Ítem Acceso Abierto La relación inmuno-endócrina en pacientes con Tuberculosis y Diabetes mellitus(2019-08-09) Fernandez, Rocío del Valle; Bay, María Luisa; D'Attilio, LucianoLa comorbilidad TB-DBT ha tomado gran relevancia en las últimas décadas ebido al notorio aumento de la población diabética, con los mayores incrementos en os países de bajos y medianos recursos donde la TB es prevalente. Ambas patologías presentan, en sí mismas, alteraciones en la comunicación bidireccional entre el SI y el neuroendocrino con una importante repercusión en el componente metabólico. A fin de profundizar los conocimientos sobre los procesos fisiopatológicos que subyacen en la asociación entre TB-DBT se analizó el perfil inmuno-endócrino-metabólico y componentes relacionados con el accionar de los GCs y del metabolismo (PPARs) en pacientes con la comorbilidad y se lo comparó con el de voluntarios enfermos de TB, con pacientes DBT y HCo. A partir de muestras de sangre se analizaron, además de diversos parámetros del laboratorio clínico, los niveles plasmáticos de citocinas proinflamatoria y antiinflamatorias (IL-6, IFN-γ, IL10), cortisol, DHEA y DHEA-S, GH, prolactina, leptina, adiponectina. Se analizó la capacidad blastogénica específica de las CMP y se cuantificaron, en estas células, los transcriptos GRα y GRβ, 11βHSD1 y 11βHSD2, así como PPARα y PPARγ. Todos los pacientes con TB mostraron niveles aumentados de cortisol, GH y mediadores proinflamatorios respecto de HCo, así como del transcripto PPARγ. A su vez, los TB+DBT tuvieron incluso más aumento que los pacientes con TB en los niveles de IFN-γ y GH, y de DBT en los de IL-6, CRP, cortisol, GH y PPARγ, mientras que IL-10 se vio incrementada tanto en TB+DBT como en DBT. Los niveles de DHEA-S se vieron descendidos en todos los grupos de pacientes difiriendo además TB+DBT de DBT. La leptina se vio descendida en sendos grupos con TB, más aún en los pacientes sin la comorbilidad que a su vez presentaron los menores índices de masa corporal. Contrariamente a lo observado en TB, las CMP de TB+DBT presentaron una alta capacidad proliferativa difiriendo tanto de HCo como de TB. El análisis de los efectos del cortisol y dosis suprafisiológicas de Glc sobre la respuesta celular de los distintos voluntarios evidenció que las CMP de pacientes con TB+DBT mostrarían una respuesta exacerbada contra antígenos de Mtb, respecto de TB, DBT y HCo, con sesgo Th1 (incremento de IL-2 e IFN-γ) aún ante dosis de cortisol inhibitorias (1uM) y no se vería alterada por la presencia de altas concentraciones de Glc. Las CMP de estos pacientes, a diferencia de lo observado en aquellos que sólo padecen de TB, no mostraron alteración de la relación entre las isoformas del receptor para GCs y a su vez, presentarían mayor disponibilidad de cortisol ante el aumento del transcripto 11βHSD1 constatado en las células de estos pacientes. Sin embargo esta potencial acción inhibitoria, en el contexto del desbalance inmuno- endócrino-metabólico que presentan los pacientes con la comorbilidad, no lograría apagar la exacerbada respuesta. En su conjunto, el análisis de las variables inmuno-endócrino-metabólicas estudiadas evidencio que la desregulación observada en los pacientes DBT fue aún mayor en aquellos pacientes con la comorbilidad, donde a su vez la respuesta proinflamatoria debida a la infección fue superior a la que desarrollaron los pacientes sólo con TB. A su vez, se estudió el efecto de altos niveles de Glc y/o de cortisol sobre la RI innata (Mø) frente a Mtb. Los resultados mostraron que el aumento de concentraciones moderadas de Glc favorecería aún más la producción de IL-1β e IL-6 y disminuirían la de IL-10, sugiriendo la inducción de un Mø no permisivo para el Mtb. En una situación de estrés con incrementos de cortisol, éste generaría una acción inhibitoria sobre la producción de citocinas pro y antiinflamatorias para las distintas dosis de Glc utilizadas, con incremento de PPARγ asociado positivamente a los altos niveles de Glc y negativamente a los niveles de IL-1β e IL-10, sugerente de que el efecto proinflamatorio modulado por la Glc se vería inhibido por el cortisol donde el PPARγ jugaría un rol ustancial en la inducción de un fenotipo macrofágico permisivo ante la infección con Mtb.