Participación de AKAP350 en la sinapsis inmune en células Natural Killer

Las células Natural Killer (NK) son células efectoras del sistema inmune innato que poseen la capacidad de eliminar células infectadas con virus y células tumorales. La citotoxicidad de las células NK requiere una remodelación extensa del citoesqueleto y una reorganización de los receptores de membrana en la sinapsis inmune (SI) establecida entre las células NK y las células blanco. Uno de estos receptores es la integrina αLβ2 (CD11a/CD18) o Leucocyte function associated antigen (LFA)-1, la cual es esencial para la formación y maduración de la SI. Al unirse a su ligando ICAM-1, LFA-1 no sólo actúa como una molécula de adhesión que permite una unión más fuerte con la célula blanco, sino que también transmite señales tempranas que promueven la activación de la célula NK. Los mecanismos por los cuales LFA-1 se acumula y organiza en el sitio de sinapsis en estas células no han sido totalmente clarificados hasta el momento. AKAP350 es una proteína de anclaje de proteína-quinasa A que nuclea complejos proteicos en el centrosoma y en el aparato de Golgi (AG). AKAP350 está implicada en procesos de generación de asimetría celular, a través de su capacidad de facilitar la transmisión de señales, como así también a través de su rol en la regulación de la dinámica de los microtúbulos. Respecto a su función en los linfocitos, la proteína AKAP350 es necesaria para la activación de LFA-1 en células T, asociada tanto a procesos de migración, como a la activación por reconocimiento de un antígeno. Los mecanismos involucrados aún no fueron determinados. En esta Tesis se analizó la participación de AKAP350 en los mecanismos involucrados en la actividad citotóxica y formación de la SI citolítica en células Natural Killer. Para esto utilizamos un sistema lentiviral de expresión de shRNA específicos para disminuir la expresión de AKAP350 (AKAP350KD) en una línea celular derivada de NK humanas, YTS, y en células NK aisladas de sangre periférica humana. Nuestros resultados mostraron que la disminución de la expresión de AKAP350 inhibió la capacidad efectora lítica de las células YTS. Esto se correlacionó con una alteración en la polarización del centrosoma y los gránulos líticos al sitio de sinapsis, y con un descenso en la acumulación de LFA-1 en la SI en células AKAP350KD, tanto al ser activadas por una célula blanco, como al ser activadas selectivamente a través de LFA-1. En experimentos realizados en células YTS y en cultivos ex vivo de células NK, se observó la presencia de un pool intracelular de vesículas que contienen LFA-1, asociadas parcialmente al AG, que polarizó hacía la SI mediante un mecanismo dependiente de AKAP350. Nuestros resultados demostraron que, así como sucede en células no inmunes, AKAP350 participa en la nucleación de microtúbulos en el AG. La disrupción del AG o la alteración de la dinámica de microtúbulos afectó la organización de LFA-1 en la SI. Este efecto también se observó cuando AKAP350 fue desplazada del AG en células YTS. Por lo tanto, el presente trabajo caracteriza la participación de AKAP350 en la actividad citotóxica de las células NK y revela un nuevo mecanismo mediante el cual el AG y, específicamente, la AKAP350 asociada al mismo, facilita el tráfico intracelular de LFA-1, el cual es de suma relevancia para la organización de LFA-1 en el sitio de sinapsis.